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GB/T 42239.2-2022 洗滌用酶制劑 第2部分: 脂肪酶
范圍
本文件規(guī)定了洗滌用脂肪酶的產(chǎn)品分類、要求、試驗方法、檢驗規(guī)則,以及標志、包裝、運輸、貯存和保質(zhì)期。
本文件適用于經(jīng)微生物發(fā)酵、提純等工藝制得的用于洗滌劑工業(yè)的脂肪酶。
術語和定義
下列術語和定義適用于本文件。
脂肪酶 lipase
可將甘油三酯(油脂)水解,在不同階段可釋放出脂肪酸、甘油二酯、甘油單酯及甘油,同時也能催化酯合成和酯交換反應的酶。
脂肪酶酶活力 lipase activity
脂肪酶催化脂肪水解的能力。
注: 脂肪酶酶活力以脂肪酶酶活力單位表示,1g固體酶粉(或1mL液體酶),在一定溫度和pH條件下,1min內(nèi)水解底物產(chǎn)生1μmol的可滴定脂肪酸,即為1個酶活力單位,用U/g表示。
符號和縮略語
下列符號和縮略語適用于本文件。
JB-04: 胡蘿卜素豬油污布。
F1: 洗前白度值。
F2: 洗后白度值。
R: 去污值。
P: 去污比值。
產(chǎn)品分類
按產(chǎn)品形態(tài)分為液體劑型和固體劑型。
要求
外觀和理化性能要求
產(chǎn)品的外觀和理化性能指標應符合表1的規(guī)定。
定量包裝要求
每批產(chǎn)品的銷售包裝凈含量應符合 JJF 1070 的要求。
試驗方法
酶活力
按附錄A進行。
采用不同于附錄A的方法測定時,應提供所應用的酶活力單位與本文件確定的酶活力單位的轉(zhuǎn)換系數(shù)。
附錄A (規(guī)范性)
酶活力的測定
A.1 方法概要
脂肪酶在一定條件下,能使甘油三酯水解成脂肪酸、甘油二酯、甘油單酯和甘油,所釋放的脂肪酸可用標準堿溶液進行中和滴定,用酚酞指示劑或自動滴定儀指示反應終點,根據(jù)消耗的堿量,計算其酶活力。反應式為:
RCOOH+NaOH→RCOONa+H2O
注1: 洗滌劑的存在會嚴重影響本方法。依不同洗滌劑的類型和濃度不同,這種影響表現(xiàn)為從抑制到激活。
注2: 酶會附著在塑料上,因此實驗中用玻璃器具,避免使用塑料材質(zhì)器具(移液槍頭除外)。
A.2 試劑
A.2.1 聚乙烯醇(PVA),聚合度1750±50[不同來源或批號的PVA對實驗結(jié)果有影響,結(jié)果報告應標明聚乙烯醇(PVA)廠家及生產(chǎn)批號]。
A.2.2 橄欖油(不同來源或批號的橄欖油對實驗結(jié)果有影響,結(jié)果報告應標明橄欖油廠家及生產(chǎn)批號)。
A.2.3 95%乙醇。
A.2.4 磷酸二氫鉀(KH2PO4)。
A.2.5 十二水磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O)。
A.2.6 氫氧化鈉。
A.2.7 鹽酸。
A.2.8 酚酞。
A.3 儀器
A.3.1 恒溫水浴: 精度為±0.2°C。
A.3.2 高速勻漿機。
A.3.3 pH計: 精度為0.01pH單位。
A.3.4 自動電位滴定儀。
A.3.5 自動移液器。
A.3.6 電磁加熱攪拌器。
A.3.7 電磁攪拌器。
A.3.8 微量滴定管: 10mL,分刻度≤0.05mL。
A.3.9 分析天平: 精度為0.0001g。
A.4 溶液
A.4.1 2%PVA溶液
稱取聚乙烯醇(PVA)10g(精確至0.1g)到500mL燒杯中,加水400mL,放入合適的轉(zhuǎn)子,在電磁加熱攪拌器上邊加熱邊攪拌,攪拌速度以能把所有的PVA攪拌起來為宜,在微沸狀態(tài)下加熱攪拌約1h,直至全部溶解,在攪拌狀態(tài)下逐漸冷卻至室溫,定容到500mL,該溶液室溫下有效期為2d,密封保存。
注: 不能使用如冰塊等快速冷卻方式。
A.4.2 橄欖油底物溶液
稱取2%PVA溶液150g,加橄欖油50g,用高速勻漿機在7000r/min(當乳化效果不好時可加大轉(zhuǎn)速)下處理3min,即成乳白色PVA乳化液,放入轉(zhuǎn)子,在電磁攪拌器上攪拌約20min,密封保存,該溶液室溫下有效期為2d。若底物溶液在保存期內(nèi)出現(xiàn)底部分層現(xiàn)象,應重新配制,若重新配制依然有底部分層現(xiàn)象或者在水浴中反應時有明顯沉淀產(chǎn)生,更換其他來源的聚乙烯醇(PVA)。
注: 每次使用前需要攪拌并在攪拌的狀態(tài)下移取該溶液,每次使用完畢及時密封保存。
A.4.3 鹽酸溶液(1mol/L)
A.4.4 氫氧化鈉溶液(0.5mol/L)
A.4.5 磷酸緩沖液(pH為7.5)
稱取磷酸二氫鉀(KH2PO4)19.6g,十二水磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O)396.2g,加水約4.5L,攪拌至溶解均勻,用0.5mol/L氫氧化鈉溶液或1mol/L鹽酸溶液調(diào)整pH至7.50±0.05,定容到5L。
A.4.6 氫氧化鈉標準溶液(0.05mol/L)
按 QB/T 2739 配制與標定0.5mol/L的氫氧化鈉標準溶液。使用時,準確稀釋10倍。
A.4.7 酚酞指示液(10g/L)
A.5 樣品溶液的制備
稱取約1g樣品(稱準至0.001g),用磷酸緩沖液溶解并稀釋。樣品稱量定容后放入轉(zhuǎn)子,在電磁攪拌器上攪拌15min。
稀釋時控制酶液濃度,推薦稀釋倍數(shù)參考表A.1,例如,當樣品酶活力約為100000U/g時,稱量約1g樣品到100mL容量瓶中,再稀釋200倍。樣品與空白消耗堿量之差在1.4mL~1.6mL范圍內(nèi),若最終滴定結(jié)果超出該范圍,重新稀釋直至該范圍內(nèi)。
A.6 試驗步驟
A.6.1 程序
按照表A.2所列程序分別進行空白和樣品試驗,選擇自動電位滴定法或酚酞指示劑滴定法進行滴定。
A.6.2 滴定
A.6.2.1 自動電位滴定法
對自動電位滴定儀進行儀器校正,用0.05mol/L的NaOH標準溶液即刻滴定,以突躍為滴定終點,最終溶液pH在30s內(nèi)保持不變,記錄消耗0.05mol/L的NaOH標準溶液的體積。
A.6.2.2 酚酞指示劑滴定法
加酚酞指示劑兩滴,用0.05mol/L的NaOH標準溶液即刻滴定,滴定至微紅色并保持在30s內(nèi)不退色為滴定終點,記錄消耗0.05mol/L的NaOH標準溶液的體積。
A.7 結(jié)果計算
產(chǎn)品的酶活力X以U/g表示,按公式(A.1)計算:
式中:
X ——產(chǎn)品的酶活力,單位為酶活力單位(U/g);
V1 ——滴定樣品時消耗0.05mol/L氫氧化鈉標準溶液的體積,單位為毫升(mL);
V2 ——滴定空白時消耗0.05mol/L氫氧化鈉標準溶液的體積,單位為毫升(mL);
c ——氫氧化鈉標準溶液濃度,單位為摩爾每升(mol/L);
0.05——氫氧化鈉標準溶液濃度換算系數(shù);
n ——試樣的稀釋倍數(shù);
50——0.05mol/L氫氧化鈉溶液1.00mL相當于脂肪酸50μmol
m ——試樣的質(zhì)量,單位為克(g);
1/15——反應時間15min,以1min計。
結(jié)果按修約值表示,當結(jié)果大于或等于105,后三位取整;當結(jié)果大于或等于104且小于105,后兩位取整;當結(jié)果大于或等于103且小于104,后一位取整。
A.8 精密度
在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不大于這兩個測定值的算術平均值的10%,以大于10%的情況不超過5%為前提。
京都電子KEM 電位滴定法自動滴定儀 AT-710S